細胞計數(shù)又稱血球計數(shù)板法,是細胞計數(shù)方法,顯微鏡下調(diào)整不同放大倍數(shù)的物鏡,通過染色的方法人工觀察細胞狀態(tài)判斷細胞死活,進行計數(shù)。通過檢測出一定體積的均勻細胞懸液中的細胞個數(shù)(對一定數(shù)量的小格或中格計數(shù),根據(jù)相應的小/中格所占的體積,可以推算出單位體積的溶液中微生物細胞的密度或總數(shù)),換算出每毫升的細胞個數(shù),從而得到細胞懸液的細胞濃度。實驗過程中采用五點取樣法,即一般隨計數(shù)室四角上的四個中方格以及正中間的一個中方格進行統(tǒng)計(對于壓線的,采取數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右的原則)。這種方法數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,按照1個細胞計算。
細胞計數(shù)要點:
①進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于1×107 L-1,如果細胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。
②要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。
③取樣計數(shù)前,應充分混勻細胞懸液,尤其時多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混勻,以求計數(shù)準確。
④數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照1個細胞計算。如果細胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計右線,不計左線。
⑤操作時,注意蓋片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。
初學者易犯的錯誤:計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。
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